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Titre : Comptes rendus hebdomadaires des séances de l'Académie des sciences. Série D, Sciences naturelles
Éditeur : Gauthier-Villars (Paris)
Date d'édition : 1979-10-01
Notice du catalogue : http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb34383065d
Notice du catalogue : https://gallica.bnf.fr/ark:/12148/cb34383065d/date
Type : texte
Type : publication en série imprimée
Langue : français
Format : Nombre total de vues : 97252
Description : 01 octobre 1979
Description : 1979/10/01 (SERD,T289,PART2)-1979/12/31.
Droits : Consultable en ligne
Droits : Public domain
Identifiant : ark:/12148/bpt6k5496019d
Source : Archives de l'Académie des sciences
Conservation numérique : Bibliothèque nationale de France
Date de mise en ligne : 01/12/2010
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C. R. Acad. Se. Paris, t. 289 (17 décembre 1979) Série D - 1325
PHYSIOLOGIE VÉGÉTALE. — Séparation des mitochondries, microsomes, étioplastes et glyoxysomes à partir d'un homogénat de cotylédons de graines de Tournesol (Helianthus annuus L.). Note (*) de Françoise Tchang et Paul Mazliak, présentée par Edouard Boureau.
Après avoir fait germer pendant 5 jours, à l'obscurité, des graines de Tournesol, on peut séparer différents organites cellulaires à partir des cotylédons. Microsomes, mitochondries, étioplastes et glyoxysomes, caractérisés par leurs enzymes-marqueurs respectifs, sont séparés par centrifugation directe de l'homogénat sur un gradient linéaire de saccharose (20 à 61 % en poids). Microsomes et mitochondries sont retrouvés en deux bandes bien distinctes aux densités respectives de 1,13 et 1,17 g.cm" 3. Les étioplastes et les glyoxysomes (sédimentant aux densités respectives de 1,23 et 1,24g.cm" 3) sont moins bien séparés.
From sunflower seed cotylédons, germinated 5 days in the dark, différent subcellular organelles can be separated. Microsomes, mitochondria, etioplasts and glyoxysomes, identifiedby means of marker enzymes, are separated by centrifuging directly the total homogenate upon a linear sucrose gradient (20-61%, w/w). Microsomes and mitochondria are recovered in two distinct bands at the respective densities of 1,13 and 1,17 g. cm~ 3. Etioplasts and glyoxysomes (sedimenting respectively at 1,23 and 1,24g.cm" 3) are not entirely separated from each other.
Les tissus de réserves des graines oléagineuses, tels l'albumen des graines de Ricin ou les cotylédons de graines de Tournesol et de Melon, contiennent d'importantes réserves lipidiques [1]. Ces réserves sont transformées en glucides au cours des 4 ou 5 premiers jours de la germination, grâce aux réactions du cycle glyoxylique [2]. Pendant cette phase de la germination les activités des enzymes caractéristiques des glyoxysomes augmentent considérablement dans les tissus de réserve ([3], [4]). Si la germination se poursuit à l'obscurité, les réserves lipidiques sont épuisées après 7 jours environ et les activités glyoxysomales disparaissent ([4], [5]).
Les activités enzymatiques caractéristiques des autres organites cellulaires (microsomes, mitochondries et étioplastes) varient également dans les tissus de réserve au cours de la germination [5]. Le rôle de ces différents organites dans les dégradations et les synthèses de lipides en cours de germination, n'a pas encore fait l'objet d'une étude exhaustive dans les graines de Tournesol; nous avons abordé la question dans une étude antérieure [4], sans avoir isolé les organites.
L'objet de cette Note est la présentation d'une méthode de séparation simultanée des différents organites des cotylédons de Tournesol intervenant dans la lipogenèse. Nous avons adapté à notre matériel la méthode de centrifugation directe de l'homogénat total du tissu de réserve, mise au point sur le Ricin, par le groupe de Beevers [6].
MATÉRIELS ET MÉTHODES. — Les expériences ont été effectuées sur des graines de Tournesol (Helianthus annuus L., var. Clairsol) provenant du CETIOM (Paris). Les graines sont mises à germer dans la vermiculite humide à 30°C à l'obscurité. Le jour 1 est le premier jour d'imbibition de la graine sèche. La sélection des plantules utilisées a été réalisée comme décrit précédemment [4].
Six paires de cotylédons de taille homogène prélevées le 5e jour, sont finement coupées à la lame de rasoir dans 6 ml du milieu suivant : saccharose 500 mM, KO 10 mM, MgCl21 mM, EDTA 1 mM, cystéine 1 mg/ml dans du tampon Tris-HCl 100 mM (pH = 7,5). L'homogénat est filtré sur tissu «miracloth» (Touzart et Matignon). Toutes ces manipulations sont effectuées entre 0 et 4°C.
Les fractions cellulaires sont séparées directement à partir de l'homogénat, par centrifugation (1 h à 65 000 g) sur un gradient linéaire de densité de saccharose (20 à 61 % en poids). Le gradient est divisé immédiatement après centrifugation en fractions de 0,62 ml.